本技術(shù)涉及菌種培養(yǎng)材料制備，更具體地說(shuō)，它涉及一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)及其制備方法。

背景技術(shù)：

1、黑牛肝菌作為珍稀食用菌，深受群眾喜愛(ài)，傳統(tǒng)栽培依賴(lài)菌根共生或仿生栽培模式。傳統(tǒng)基質(zhì)多采用木屑、紅壤等天然材料，存在養(yǎng)分釋放不均、物理穩(wěn)定性差、易受微生物污染等缺陷，且難以適配工廠化、規(guī)?；a(chǎn)需求。

2、此外，由于黑牛肝菌對(duì)纖維素、木質(zhì)素需求較高，在黑牛肝菌培養(yǎng)基質(zhì)中常用到植物基材料，但大多含有吲哚乙酸(iaa)，iaa全濃度抑制黑牛肝菌發(fā)育。而且發(fā)酵過(guò)程中，基質(zhì)不見(jiàn)光，iaa分解緩慢，搭配一些菌種的分解作用，會(huì)提高培養(yǎng)基質(zhì)中iaa的富集，從而增加食用菌菌絲的老化。一些化學(xué)方法，增加成本的同時(shí)也會(huì)造成藥劑的殘留，影響食品安全。而人工晾曬在增加時(shí)間成本的同時(shí)，還會(huì)導(dǎo)致?tīng)I(yíng)養(yǎng)元素的流失。

3、基于上述陳述，本技術(shù)提供一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)及其制備方法。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為了解決背景技術(shù)中提出的問(wèn)題，本技術(shù)提供了一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)及其制備方法。

2、本技術(shù)提供了一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)及其制備方法，采用如下的技術(shù)方案：

3、一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)的制備方法，包括以下步驟：

4、s1.制備緩釋材料，并使用緩釋材料將復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑進(jìn)行包封，制備得到緩釋組分；

5、s2.稱(chēng)取配方份質(zhì)量的食用菌菌渣、腐殖土、松針葉、麥麩、干牛糞混合，得到發(fā)酵基質(zhì)，隨后使用復(fù)合菌種對(duì)發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵完畢后與配方份質(zhì)量的磷酸二氫鉀、氯吡脲、生石灰和緩釋組分混合，即得一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)；

6、其中，緩釋組分由緩釋材料將復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑進(jìn)行包封得到；緩釋材料由木質(zhì)素與海藻酸鈉和緩釋增強(qiáng)劑混合后包覆復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑，經(jīng)熱覆涂、滾動(dòng)排濕、干燥制得。

7、進(jìn)一步地，s1步驟中，所述緩釋組分由以下步驟制得：

8、s11.將木質(zhì)素加入naoh溶液中，攪拌后加入海藻酸鈉和緩釋增強(qiáng)劑，升高體系溫度至60-70℃，繼續(xù)攪拌，冷卻至室溫，得到包覆材料；

9、s12.將復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑熱覆涂包覆材料，復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑與內(nèi)層包覆材料的質(zhì)量比為100:(15-20)，隨后出料并將所得顆粒物在30-40℃下干燥10-20小時(shí)，即得緩釋組分。

10、進(jìn)一步優(yōu)選地，s1步驟中，所述緩釋組分由以下步驟制得：

11、s11.將木質(zhì)素加入0.1mol/l?naoh溶液中，在室溫條件下以30-90rpm速率攪拌20-30分鐘后加入海藻酸鈉和緩釋增強(qiáng)劑，升高體系溫度至60-70℃，繼續(xù)攪拌20-30分鐘后，冷卻至室溫，得到包覆材料；

12、s12.將復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑置于圓盤(pán)造粒機(jī)上，熱覆涂包覆材料，滾動(dòng)排濕形成顆粒，盤(pán)體傾角為35-55°，轉(zhuǎn)速10-12rpm，復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑與內(nèi)層包覆材料的質(zhì)量比為100:(15-20)，隨后出料并將所得顆粒物在30-40℃下干燥10-20小時(shí)，即得緩釋組分。

13、上述反應(yīng)過(guò)程中，使用木質(zhì)素和海藻酸鈉材料為基礎(chǔ)，制備得到包覆材料，木質(zhì)素在堿性條件下部分解聚，其酚羥基與海藻酸鈉的羧基發(fā)生酯化反應(yīng)，生成酯鍵，且酚羥基和羧基還可以通過(guò)氫鍵結(jié)合，同時(shí)木質(zhì)素的陽(yáng)離子特性與海藻酸鈉的陰離子基團(tuán)形成靜電作用，形成物理交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，制備得到包覆材料，用于包覆復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑。

14、進(jìn)一步地，s11步驟中，木質(zhì)素、naoh溶液、海藻酸鈉和緩釋增強(qiáng)劑的用量比為(0.5-1.5)g:100ml:(1-3)g:(2-4)g。

15、進(jìn)一步地，s11步驟中，所述緩釋增強(qiáng)劑由以下步驟制得：

16、在室溫條件下將蜂巢粉與增塑劑、碳酸鈣按照1:(0.1-0.3):(0.1-0.3)比例混合，即得緩釋增強(qiáng)劑。

17、優(yōu)選的，所述增塑劑為聚乙二醇或甘油。

18、進(jìn)一步地，s12步驟中，所述復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑由維生素b2、維生素b6和維生素c按照(1-5):5:(2-3)的質(zhì)量比混合得到。

19、進(jìn)一步地，s2步驟中，所述復(fù)合菌種具體由以下步驟制得：

20、s21、按照以下組分配置活化培養(yǎng)基：8-12g/l葡萄糖、4-6g/l酵母抽提物、8-12g/l松針?lè)邸?-3g/l硫酸銨、0.5-1.5g/l蛋白胨、0.2-0.6g/l七水合硫酸鎂、0.5-1.5g/l磷酸二氫鉀、0.05-0.2g/l七水合硫酸亞鐵；

21、s22、將貪噬菌和木霉菌在s21步驟中得到的活化培養(yǎng)基中，搖床振蕩培養(yǎng)，調(diào)節(jié)體系ph值為6.5-7.0，培養(yǎng)溫度為28-30℃，搖床速率為120-150rpm，培養(yǎng)10-20小時(shí)后接入黑曲霉菌，調(diào)節(jié)體系ph值為6.0-6.5，設(shè)置培養(yǎng)溫度為25-28℃，發(fā)酵15-20小時(shí)后，收集培養(yǎng)體系，離心，過(guò)濾，洗滌濾得物，干燥，即得復(fù)合菌種。

22、進(jìn)一步優(yōu)選地，s2步驟中，所述復(fù)合菌種具體由以下步驟制得：

23、s21、按照以下組分用無(wú)菌去離子水配置活化培養(yǎng)基：8-12g/l葡萄糖、4-6g/l酵母抽提物、8-12g/l松針?lè)邸?-3g/l硫酸銨、0.5-1.5g/l蛋白胨、0.2-0.6g/l七水合硫酸鎂、0.5-1.5g/l磷酸二氫鉀、0.05-0.2g/l七水合硫酸亞鐵；

24、s22、將貪噬菌和木霉菌在s21步驟中得到的活化培養(yǎng)基中，搖床振蕩培養(yǎng)，使用0.1mol/氨水調(diào)節(jié)體系ph值為6.5-7.0，培養(yǎng)溫度為28-30℃，搖床速率為120-150rpm，培養(yǎng)10-20小時(shí)后接入黑曲霉菌，0.1mol/l鹽酸溶液調(diào)節(jié)體系ph值為6.0-6.5，設(shè)置培養(yǎng)溫度為25-28℃，發(fā)酵15-20小時(shí)后，收集培養(yǎng)體系，以8000-10000rpm速率離心10-20分鐘，過(guò)濾，無(wú)菌去離子水洗滌濾得物，自然干燥至水分含量為40-50％，即得復(fù)合菌種。

25、進(jìn)一步地，s22步驟中，貪噬菌、木霉菌、黑曲霉菌的活菌數(shù)比為(3-5):(4-12):(1-2)，三種菌種的總接種量為6-10％。

26、進(jìn)一步地，使用復(fù)合菌種對(duì)發(fā)酵基質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵的具體操作為：

27、將復(fù)合菌種與發(fā)酵基質(zhì)攪拌混合，使用無(wú)菌去離子水調(diào)節(jié)體系含水量為45-65％，設(shè)置體系ph值為5.5-6.0，在15-25℃、空氣濕度為65-75％環(huán)境下發(fā)酵15-35天，期間設(shè)置翻拌次數(shù)為4-6次。

28、一種黑牛肝菌袋料培養(yǎng)基質(zhì)，包括以下質(zhì)量份原料：

29、復(fù)合菌種5-10份、食用菌菌渣120-200份、腐殖土50-85份、干牛糞22-40份、松針葉40-75份、麥麩35-65份、磷酸二氫鉀15-25份、氯吡脲0.5-1.5份、生石灰35-85份和緩釋組分10-20份。

30、綜上所述，本技術(shù)具有以下有益效果：

31、本發(fā)明技術(shù)方案中，使用木質(zhì)素和海藻酸鈉材料為基礎(chǔ)，制備得到包覆材料，木質(zhì)素在堿性條件下部分解聚，其酚羥基與海藻酸鈉的羧基發(fā)生酯化反應(yīng)，生成酯鍵，且酚羥基和羧基還可以通過(guò)氫鍵結(jié)合，同時(shí)木質(zhì)素的陽(yáng)離子特性與海藻酸鈉的陰離子基團(tuán)形成靜電作用，形成物理交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)，用于包覆復(fù)合生長(zhǎng)促進(jìn)劑。

32、包覆材料中還添加有緩釋增強(qiáng)劑，具體由蜂巢粉與增塑劑、碳酸鈣、氯化鈣組成，用于調(diào)節(jié)包材的包封和釋放效果，使其更適配與黑牛肝菌的采收周期。蜂巢粉和碳酸鈣的高比表面積可吸附更多生長(zhǎng)促進(jìn)劑，減少初期突釋現(xiàn)象。碳酸鈣和氯化鈣作為填料，可提高包覆材料的硬度、耐磨性和耐久性，同時(shí)調(diào)節(jié)材料的熱膨脹系數(shù)，減少因環(huán)境變化導(dǎo)致的性能波動(dòng)。碳酸鈣和氯化鈣作為無(wú)機(jī)填料，與蜂巢粉共同形成多孔結(jié)構(gòu)。這種結(jié)構(gòu)可限制水分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的擴(kuò)散速率，從而延長(zhǎng)釋放時(shí)間。同時(shí)，蜂巢粉的多孔性增強(qiáng)了吸附能力，促進(jìn)生長(zhǎng)促進(jìn)劑在包覆材料中的均勻分布。碳酸鈣在酸性條件下(植物根系分泌的有機(jī)酸環(huán)境中)逐漸溶解，釋放鈣離子并破壞海藻酸鈉的交聯(lián)網(wǎng)絡(luò)。這種ph響應(yīng)性設(shè)計(jì)使生長(zhǎng)促進(jìn)劑在如根系附近實(shí)現(xiàn)定向釋放，提高養(yǎng)分利用效率，并且可以避免培養(yǎng)基質(zhì)中ph值劇烈波動(dòng)。海藻酸鈉的羧酸基團(tuán)與碳酸鈣中游離的鈣離子發(fā)生離子交聯(lián)，形成部分凝膠網(wǎng)絡(luò)，可以進(jìn)一步強(qiáng)化木質(zhì)素、海藻酸鈉網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性，提升了包覆材料的機(jī)械強(qiáng)度，進(jìn)一步通過(guò)物理限制減緩生長(zhǎng)促進(jìn)劑的釋放速率。

33、本發(fā)明技術(shù)方案中，使用貪噬菌、木霉菌和黑曲霉菌進(jìn)行復(fù)配，得到復(fù)合菌種用于發(fā)酵基質(zhì)的發(fā)酵，貪噬菌分泌的蛋白酶、淀粉酶等胞外酶可以分解底物中纖維素、木質(zhì)素、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)，增強(qiáng)腐殖土和松針葉的分解，釋放可溶性養(yǎng)分供黑牛肝菌利用。同時(shí)，貪噬菌可以通過(guò)其特有的iad基因簇將iaa分解成吲哚和乙酸單體，減少iaa對(duì)黑牛肝菌的生長(zhǎng)抑制，并且乙酸單體可以作為發(fā)酵底物，促進(jìn)協(xié)同菌的發(fā)酵速率，得到的吲哚單體可以促進(jìn)黑牛肝菌中黑色素的形成，黑牛肝菌中黑色素積累可增強(qiáng)抗逆性，并且提高食用菌產(chǎn)品品相。此外，方案中所采用的綠色木霉菌則主導(dǎo)纖維素酶分泌，黑曲霉在延遲接種后強(qiáng)化木聚糖酶和β-葡萄糖苷酶活性，形成復(fù)合酶系統(tǒng)。三者復(fù)配進(jìn)行混合發(fā)酵，可以通過(guò)肉桂酸途徑、苯甲酸途徑等多方面轉(zhuǎn)化結(jié)合態(tài)物質(zhì)，提高有效成分釋放量。