本發(fā)明屬于血小板保存領(lǐng)域，具體涉及一種用于血小板常溫保存的方法。

背景技術(shù)：

1、血小板（platelet,?plt）是維持機(jī)體止血功能的重要血細(xì)胞，正常人外周血中plt數(shù)量為(100-300)×109/ml。由于一些疾病及外傷導(dǎo)致外周循環(huán)中plt數(shù)量下降，當(dāng)數(shù)量低于20×109/ml時(shí)會(huì)大大增加內(nèi)出血的風(fēng)險(xiǎn)，甚至危及生命。當(dāng)臨床上出現(xiàn)輸血指證時(shí)，則需要濃縮plt的供應(yīng)。

2、臨床常用的血小板保存方法為在血漿中常溫震蕩保存，機(jī)采血小板可以保存約5天。然而，血小板的保存液血漿在輸注入人體內(nèi)后會(huì)帶來多種輸血相關(guān)不良反應(yīng)，包括非溶血性發(fā)熱、過敏、循環(huán)超負(fù)荷等，對人體帶來極大危害。

3、因此，近年來，為降低血漿使用而進(jìn)行血小板添加劑（pas）的開發(fā)，成為了研究熱點(diǎn)之一。自rock等人1985年提出pas以來，已經(jīng)陸續(xù)開發(fā)出pas-a、pas-b、pas-c、pas-d、pas-e、pas-f和pas-g等，以及其他新型的血小板特殊添加劑m-sol（mixture?of?solutions，多種溶液的混合物）和brs-a（bicarbonated?ringer's?solution-acd-a，碳酸氫鹽林格氏溶液-枸櫞酸鹽抗凝劑）等多種版本。然而，這些保存方法，都存在一定的問題，例如血小板保存損傷、增加血小板活化、和引發(fā)發(fā)熱性輸血不良反應(yīng)等。

4、因此，迫切需要提供一種保存效果好且副作用更小的血小板保存液，以實(shí)現(xiàn)血小板的活性和功能的有效保存。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種無血清的血小板常溫保存液，并基于所述血小板保存液提供了一種血小板常溫保存方法。

2、在本發(fā)明的第一方面，提供了一種用于常溫保存的血小板保存液，所述血小板保存液包含以下組分：

3、（i）第一組分，所述第一組分包含：60-96體積份數(shù)的碳酸氫鈉林格注射液（brs溶液）、2-20體積份數(shù)的acd-a溶液、2-20體積份數(shù)的血清白蛋白溶液；和

4、（ii）第二組分，所述第二組分包含以下補(bǔ)加化合物：nahco3和naac，并且nahco3的補(bǔ)加濃度c1為5-15mm，naac的補(bǔ)加濃度c2為5-15mm，所述補(bǔ)加濃度按血小板保存液的體積計(jì)。

5、在另一優(yōu)選例中，c1與c2之比r0為1/2-2/1。

6、在另一優(yōu)選例中，c1與c2之比r0為0.8:1?-?1.2:1，更佳地為1:1。

7、在另一優(yōu)選例中，nahco3的補(bǔ)加濃度c1為7-13mm，較佳地8-12mm。

8、在另一優(yōu)選例中，naac的補(bǔ)加濃度c2為7-13mm，較佳地8-12mm。

9、在另一優(yōu)選例中，第一組分的總體積份數(shù)v1和第二組分總體積的體積份數(shù)v2的比值v1/v2≥5，較佳地為≥10，更佳地為≥20，最佳地為≥25。

10、在另一優(yōu)選例中，第二組分以固體方式加入，不改變第一組分在血小板保存液中的占比。

11、在另一優(yōu)選例中，所述常溫是指4-26℃。

12、在另一優(yōu)選例中，所述常溫為10-26℃，較佳地為15-25℃，最佳地為20-24℃。

13、在另一優(yōu)選例中，所述brs溶液包含：97.58mm氯化鈉、3.99mm氯化鉀、27.07mm碳酸氫鈉、1.5mm氯化鈣、1mm氯化鎂、和1.35mm枸櫞酸鈉。

14、在另一優(yōu)選例中，所述acd-a溶液包含：124.12mm葡萄糖、37.42mm枸櫞酸、和73.76mm枸櫞酸鈉。

15、在另一優(yōu)選例中，所述血清白蛋白溶液是哺乳動(dòng)物來源的血清白蛋白溶液。

16、在另一優(yōu)選例中，所述動(dòng)物來源的血清白蛋白溶液包含：人血清白蛋白溶液、牛血清白蛋白溶液、羊血清白蛋白溶液、或其組合。

17、在另一優(yōu)選例中，所述血清白蛋白溶液包含血清。

18、在另一優(yōu)選例中，所述血清白蛋白溶液是人血清白蛋白（hsa）溶液。

19、在另一優(yōu)選例中，所述第一組分包含2-20體積份數(shù)的hsa溶液，較佳地為3-18，更佳地為4-16，最佳地為5-15。

20、在另一優(yōu)選例中，所述第一組分包含10體積份數(shù)的hsa溶液。

21、在另一優(yōu)選例中，所述第一組分包含2-20體積份數(shù)的acd-a溶液，較佳地為3-18，更佳地為4-16，最佳地為5-15。

22、在另一優(yōu)選例中，所述第一組分包含10體積份數(shù)的acd-a溶液。

23、在另一優(yōu)選例中，所述保存液包含以下組分：

24、（i）第一組分，所述第一組分包含：80體積份數(shù)的brs溶液、10體積份數(shù)的acd-a、10體積份數(shù)的hsa溶液；和

25、（ii）第二組分，所述第二組分包含以下補(bǔ)加化合物：nahco3和naac，并且nahco3的補(bǔ)加濃度c1為5-15mm，naac的補(bǔ)加濃度c2為5-15mm，所述補(bǔ)加濃度按血小板保存液的體積計(jì)。

26、在另一優(yōu)選例中，c1與c2之比r0為1/2-2/1

27、在另一優(yōu)選例中，所述保存液包含以下組分：10-15mm葡萄糖、75-85mm氯化鈉、1-5mm氯化鉀、25-35mm碳酸氫鈉、0.5-1.5mm氯化鈣、0.6-1mm氯化鎂、1-8mm枸櫞酸、4-12mm枸櫞酸鈉、5-15mm乙酸鈉、以及5%-15%的hsa。

28、在另一優(yōu)選例中，12mm葡萄糖、78mm氯化鈉、3mm氯化鉀、32mm碳酸氫鈉、1mm氯化鈣、0.8mm氯化鎂、4mm枸櫞酸、8mm枸櫞酸鈉、10mm乙酸鈉、以及10%的hsa。

29、在另一優(yōu)選例中，所述保存液包含以下組分：12.41mm葡萄糖、78.06mm氯化鈉、3.19mm氯化鉀、31.66mm碳酸氫鈉、1.2mm氯化鈣、0.8mm氯化鎂，3.74mm枸櫞酸，8.46mm枸櫞酸鈉，10mm乙酸鈉、以及10%的hsa。

30、在本發(fā)明的第二方面，提供了本發(fā)明第一方面所述的血小板保存液的用途，用于保存血小板。

31、在另一優(yōu)選例中，用于洗滌血小板。

32、在另一優(yōu)選例中，所述血小板包含：臍帶血來源的血小板、外周血來源的血小板、體外再生血小板、或其組合。

33、在本發(fā)明的第三方面，提供了本發(fā)明第一方面所述的血小板保存液的制備方法，包括以下步驟：

34、（s1）稱取、溶解并混合保存液的組分，得到混合溶液；

35、（s2）將所述混合溶液進(jìn)行滅菌，從而獲得本發(fā)明第一方面所述的保存液。

36、在本發(fā)明的第四方面，提供了一種常溫保存血小板的方法，包括以下步驟：在血小板中添加本發(fā)明第一方面所述的血小板保存液后，將所得血小板混合物常溫保存。

37、在另一優(yōu)選例中，所述血小板包含：臍帶血來源的血小板、外周血來源的血小板、體外再生血小板、或其組合。

38、在另一優(yōu)選例中，所述常溫為10-26℃，較佳地為15-25℃，最佳地為20-24℃。

39、在另一優(yōu)選例中，添加所述保存液至血小板終濃度為1e8/ml-2e9/ml。

40、在另一優(yōu)選例中，添加所述保存液至血小板終濃度為1e8/ml-1e9/ml。

41、在另一優(yōu)選例中，所述保存的時(shí)間≥3天，較佳地為≥4天，更佳地為≥5天，最佳地為≥7天。

42、在另一優(yōu)選例中，所述方法包括還包括以下步驟：對常溫保存后的血小板的特征進(jìn)行表征。

43、在另一優(yōu)選例中，所述常溫保存是在22℃保存7天，所述特征包括：

44、(z1)保存前血小板的cd41+cd42b+的比例y0和保存后血小板的cd41+cd42b+的比例y1的差值y0-y1≤8%，較佳地為≤6%，更佳地為≤4%；和/或

45、(z2)保存后的血小板在加入激活劑后的激活能力n1和不加激活劑時(shí)的激活能力n0的比值n1/n0≥5，較佳地為≥10；更佳地為≥15，最佳地為≥20。

46、在另一優(yōu)選例中，所述激活能力是血小板pac-1表達(dá)水平。

47、在本發(fā)明的第五方面，提供了一種血小板混合物，所述血小板混合物包括：本發(fā)明第一方面所述的血小板保存液和血小板。

48、應(yīng)理解，在本發(fā)明范圍內(nèi)中，本發(fā)明的上述各技術(shù)特征和在下文(如實(shí)施例)中具體描述的各技術(shù)特征之間都可以互相組合，從而構(gòu)成新的或優(yōu)選的技術(shù)方案。限于篇幅，在此不再一一累述。