本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體的涉及一種高喜樹堿類抗體偶聯(lián)藥物、其制備方法及應用。

背景技術(shù)：

1、喜樹堿(camptotheca,?cpt)是一種從原產(chǎn)于中國的喜樹樹皮和莖中分離得到的五環(huán)生物堿。喜樹堿可以抑制拓撲異構(gòu)酶i，導致細胞死亡。由于喜樹堿具有細胞毒性機制和廣譜抗腫瘤活性，人們一直致力于開發(fā)喜樹堿的臨床類似物。

2、抗體偶聯(lián)藥物（adc）是一種通過一個合理構(gòu)建的連接子將細胞毒性小分子藥物偶聯(lián)到單克隆抗體上的復合物，可以向腫瘤內(nèi)選擇性地輸送有效的細胞毒性藥物，從而增加藥物的靶向性提高療效，并減少毒副作用。最近喜樹堿類的化合物作為小分子被應用到一些抗體藥物偶聯(lián)物（adc）中，比如sn38和dxd就作為彈頭分子分別用于上市adc藥物trodelvy和enhertu中。專利申請wo2020063676和cn?112125915在dxd的化合物上進行了改造。但是，相較于傳統(tǒng)喜樹堿，具有β-羥基內(nèi)酯環(huán)結(jié)構(gòu)的高喜樹堿類（hcpt）化合物，保留高的抗腫瘤活性（bailly,?c.?crit.?rev.?oncol.?hematol.?2003,?45,?91），并且diflomotecan的topo?i抑制活性要強于喜樹堿（kroep,?j.?r.;?gelderblom,?h.?expert.opin.?investig.?drugs?2009,?18,?69）。但是由于缺乏合適的偶聯(lián)位點，目前還未見將其應用于adc中。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是為了克服現(xiàn)有技術(shù)中高喜樹堿類衍生物不可偶聯(lián)的缺陷，開發(fā)出新的高喜樹堿類抗體藥物偶聯(lián)物。本發(fā)明提供的抗體藥物偶聯(lián)物具有很好的細胞毒活性，能夠抑制腫瘤細胞的增值。本發(fā)明提供的抗體藥物偶聯(lián)物還具有很好的體內(nèi)抗腫瘤活性，能夠顯著抑制腫瘤的生長。

2、本發(fā)明提供了一種如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽，

3、

4、其中，t為或其立體異構(gòu)體；

5、r1和r2獨立地為c1-6烷基、c1-6烷氧基或鹵素；

6、或者r1和r2與相鄰的碳原子形成或，“”表示并環(huán)的連接位置；

7、l為，其中a端與t連接，b端與q連接；

8、q為單個氨基酸殘基、二肽殘基、三肽殘基或四肽殘基；

9、x為、、、、、、或，其中2端與z連接，1端與連接；

10、ra和rb獨立地為h、d、鹵素、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、氘代c1-6烷基、c1-6烷氧基、羥基、氨基、氰基、硝基、3-10元環(huán)烷基或3-10元雜環(huán)基；

11、或者，ra和rb與其相連接的碳原子一起形成3-10元環(huán)烷基或3-10元雜環(huán)基；

12、rc和rd獨立地為h、c1-6烷基、鹵素、鹵代c1-6烷基、氘代c1-6烷基、3-10元環(huán)烷基、3-10元雜環(huán)基、6-14元芳基或5-10元雜芳基；

13、或者，rc和rd與其相連接的碳原子一起形成3-10元環(huán)烷基或3-10元雜環(huán)基；

14、m1、m2、m3、m4、m5、m6和m7獨立地為0-20的整數(shù)；

15、n1、n2和n3獨立地為0-10的整數(shù)；

16、q為0-6的整數(shù)；

17、r為4-20的整數(shù)；

18、z為或，其中c端與x連接，d端與gl連接；

19、p為1-8；

20、gl為抗體；

21、所述3-10元雜環(huán)基和5-10元雜芳基中的雜原子獨立地為n、o或s中的一種或多種，雜原子的個數(shù)獨立地為1、2、3或4個。

22、在本發(fā)明的某一方案中，所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽中，某些基團具有如下定義，未提及的基團的定義如本發(fā)明中任一方案所述（本段內(nèi)容以下簡稱為“在本發(fā)明的某一方案中”），r1和r2獨立地為c1-6烷基時，所述的c1-6烷基優(yōu)選為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基或叔丁基，例如甲基。

23、在本發(fā)明的某一方案中，r1和r2獨立地為c1-6烷氧基時，所述的c1-6烷氧基為甲氧基、-och2ch3、-och(ch3)2或叔丁氧基，例如甲氧基；

24、在本發(fā)明的某一方案中，r1和r2獨立地為鹵素時，所述的鹵素為氟、氯、溴或碘，例如氟或氯。

25、在本發(fā)明的某一方案中，所述如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物為如式ia所示的結(jié)構(gòu)：

26、

27、其中，r1、r2、q、x、z、gl和p的定義如上所述。

28、在本發(fā)明的某一方案中，r1和r2獨立地為c1-6烷基或鹵素，例如甲基或氟。

29、在本發(fā)明的某一方案中，所述單個氨基酸殘基為、、、、、、、或，其中，e端與-nh-連接，f端與-c(=o)-連接。

30、在本發(fā)明的某一方案中，所述二肽殘基為c=o?-lys-phe-?nh、c=o?-ala-val-?nh、c=o?-lys-val-nh、c=o?-lys-ala-?nh、c=o?-cit-val-?nh、c=o?-cit-phe-?nh、c=o?-cit-leu-?nh、c=o?-cit-ile-?nh、c=o?-arg-phe-?nh、c=o?-cit-trp-?nh或c=o-val-gly-?nh，優(yōu)選為c=o-cit-val-?nh或c=o?-ala-val-?nh。

31、在本發(fā)明的某一方案中，所述三肽殘基為c=o?-ala-val-glu-?nh、c=o?-cit-val-glu-?nh、c=o?-ala-val-αglu-?nh或c=o?-cit-val-αglu-nh。

32、在本發(fā)明的某一方案中，所述四肽殘基為c=o?-gly-phe-(gly)2-?nh或c=o?-(gly)2-phe-gly-?nh。

33、所述二肽殘基、三肽殘基或四肽殘基中的c=o表示所述二肽殘基、三肽殘基或四肽殘基的左側(cè)通過其自身的羰基與所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物中的氨基連接，所述二肽殘基、三肽殘基或四肽殘基中的nh表示所述的二肽殘基、三肽殘基或四肽殘基的右側(cè)通過其自身的氨基與所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物中的羰基連接。

34、在本發(fā)明的某一方案中，q為二肽殘基。

35、在本發(fā)明的某一方案中，x為或，其中2端與z連接，1端與連接，m2、n2、r和q的定義如上所述。

36、在本發(fā)明的某一方案中，m2為6-14的整數(shù)，例如8或12。

37、在本發(fā)明的某一方案中，n2為1-6的整數(shù)，例如2或3。

38、在本發(fā)明的某一方案中，q為4。

39、在本發(fā)明的某一方案中，r為16。

40、在本發(fā)明的某一方案中，gl為her2抗體，例如trastuzumab（曲妥珠單抗）。

41、在本發(fā)明的某一方案中，p可以為整數(shù)，也可以為小數(shù)，優(yōu)選為7-8，例如7.6、7.7、7.8或8.0。

42、在本發(fā)明的某一方案中，所述z的d端和所述的gl以硫醚鍵相連。所述的gl可通過含二硫鍵的抗體（例如trastuzumab）在還原劑作用下將二硫鍵還原為巰基后得到。本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的是，z是與打開二硫鍵后的抗體自身所含有巰基（例如，通過還原劑還原抗體自身的二硫鍵可以打開二硫鍵，生成-sh）進行連接。例如抗體藥物偶聯(lián)物her2-adc1中，-s-并非另外外接的硫原子，而是打開雙硫鍵后的her2抗體自身所含有巰基與進行連接后形成的-s-。

43、在本發(fā)明的某一方案中，所述藥學上可接受的鹽可為三氟醋酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、磷酸鹽、硫酸鹽、高氯酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、馬來酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽或丙二酸鹽，例如三氟醋酸鹽。

44、在本發(fā)明的某一方案中，t為或其立體異構(gòu)體；

45、r1和r2獨立地為c1-6烷基或鹵素；

46、l為，其中a端與t連接，b端與q連接；

47、q為或，其中，e端與-nh-連接，f端與-c(=o)-連接；

48、x為或，其中2端與z連接，1端與連接；m2為6-14的整數(shù)；n2為1-6的整數(shù)；q為4；r為16；

49、z為或，其中c端與x連接，d端與gl連接；

50、p為1-8；

51、gl為her2抗體。

52、在本發(fā)明的某一方案中，t為、、、、或。

53、在本發(fā)明的某一方案中，t為。

54、在本發(fā)明的某一方案中，q為或，其中，e端與-nh-連接，f端與-c(=o)-連接。

55、在本發(fā)明的某一方案中，x為、、或，其中，2端與z連接，1端與連接。

56、在本發(fā)明的某一方案中，所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物為如下任一結(jié)構(gòu)：

57、、

58、、

59、、

60、、

61、、

62、或

63、，其中g(shù)l為trastuzumab。

64、本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，其包括如上所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽，和至少一種藥用輔料。

65、本發(fā)明還提供了一種如上所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽在制備用于預防或治療癌癥的藥物中的用途。所述的癌癥優(yōu)選為乳腺癌、肺癌、腎癌、肝癌、卵巢癌、尿道癌、前列腺癌、多形性成膠質(zhì)細胞瘤、胰腺癌、大腸癌、胃腸道間質(zhì)瘤、宮頸癌、鱗狀細胞癌、腹膜癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、外陰癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、肉瘤、黑色素瘤、膀胱癌、胃癌或食道癌，更優(yōu)選為乳腺癌。

66、本發(fā)明還提供了一種如上所述的如式i所示的抗體藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽在制備用于預防或治療her2相關(guān)、介導的疾病的藥物中的用途。所述疾病可為癌癥，優(yōu)選為乳腺癌、肺癌、腎癌、肝癌、卵巢癌、尿道癌、前列腺癌、多形性成膠質(zhì)細胞瘤、胰腺癌、大腸癌、胃腸道間質(zhì)瘤、宮頸癌、鱗狀細胞癌、腹膜癌、結(jié)腸癌、直腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮癌、唾液腺癌、腎癌、外陰癌、甲狀腺癌、陰莖癌、白血病、惡性淋巴瘤、漿細胞瘤、骨髓瘤、肉瘤、黑色素瘤、膀胱癌、胃癌或食道癌，更優(yōu)選為乳腺癌。

67、本發(fā)明還提供了一種如式iii所示的連接基-藥物偶聯(lián)物或其藥學上可接受的鹽，

68、

69、其中，y為或，t、l、q和x的定義如上所述。

70、在本發(fā)明的某一方案中，所述的如式iii所示的連接基-藥物偶聯(lián)物為如示iiia所示的結(jié)構(gòu)，

71、

72、其中，r1、r2、q、x和y的定義如上所述。

73、在本發(fā)明的某一方案中，所述的如式ⅲ所示的連接基-藥物偶聯(lián)物為如下任一結(jié)構(gòu)：

74、

75、ⅲ-1

76、

77、ⅲ-2

78、

79、ⅲ-3

80、

81、ⅲ-4

82、

83、ⅲ-5

84、

85、ⅲ-6

86、

87、ⅲ-7

88、術(shù)語定義

89、本發(fā)明所使用的立體化學定義和規(guī)則一般遵循s.?p.?parker,?ed.,?mcgraw-hill?dictionary?of?chemical?terms?(1984)?mcgraw-hill?book?company,?new?york;and?eliel,?e.?and?wilen,?s.,?"stereochemistry?of?organic?compounds",?johnwiley?&?sons,?inc.,?new?york,?1994。

90、依據(jù)起始物料和方法的選擇，本發(fā)明化合物可以以可能的異構(gòu)體中的一個或它們的混合物，例如外消旋體和非對應異構(gòu)體混合物（這取決于不對稱碳原子的數(shù)量）的形式存在。光學活性的(r)-或(s)-異構(gòu)體可使用手性合成子或手性試劑制備，或使用常規(guī)技術(shù)拆分。

91、所得的任何立體異構(gòu)體的混合物可以依據(jù)組分物理化學性質(zhì)上的差異被分離成純的或基本純的幾何異構(gòu)體，對映異構(gòu)體，非對映異構(gòu)體，例如，通過色譜法和/或分步結(jié)晶法。

92、在本說明書中，可由本領(lǐng)域技術(shù)人員選擇基團及其取代基以提供穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)部分和化合物。當通過從左向右書寫的常規(guī)化學式描述取代基時，該取代基也同樣包括從右向左書寫結(jié)構(gòu)式時所得到的在化學上等同的取代基。

93、術(shù)語“鹵素”是指氟、氯、溴或碘。

94、術(shù)語“烷基”是指具有指定的碳原子數(shù)（例如c1~c6）的直鏈或支鏈烷基。烷基包括但不限于甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。

95、術(shù)語“芳基”是指具有指定的碳原子數(shù)（例如c6~c10）的、僅由碳原子組成的環(huán)狀基團，其為單環(huán)或多環(huán)，且至少一個環(huán)具有芳香性（符合休克爾規(guī)則）。芳基通過具有芳香性的環(huán)或不具有芳香性的環(huán)與分子中的其他片段連接。芳基包括但不限于苯基、萘基等。

96、基團末端的“-”是指該基團通過該位點與分子中的其他片段連接。例如，ch3-c(=o)-是指乙酰基。

97、在本技術(shù)中，作為基團或是其它基團的一部分，術(shù)語“亞烷基”表示從飽和的直鏈或支鏈烴基中去掉兩個氫原子所得到的飽和的二價烴基基團；即烷基中的一個氫被取代，烷基的定義如上所述。亞烷基基團的實例包括亞甲基(-ch2-)，亞乙基{包括-ch2ch2-或-ch(ch3)-}，亞異丙基{包括-ch(ch3)ch2-或-c(ch3)2-}等等。

98、在本技術(shù)中，作為基團或是其它基團的一部分，術(shù)語“烷氧基”是指-o-烷基，烷基的定義如上所述。

99、術(shù)語“環(huán)烷基”是指具有指定的碳原子數(shù)（例如c3~c6）的、僅由碳原子組成的、飽和的單環(huán)環(huán)狀基團。環(huán)烷基包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基等。

100、術(shù)語“雜環(huán)基”是指具有指定環(huán)原子數(shù)（例如5~10元）的、指定雜原子數(shù)（例如1個、2個、3個或4個）的、指定雜原子種類（n、o和s中的一種或多種）的環(huán)狀基團，其為單環(huán)、橋環(huán)或螺環(huán)，且每一個環(huán)均為飽和的。雜環(huán)烷基包括但不限于氮雜環(huán)丁烷基、四氫吡咯基、四氫呋喃基、嗎啉基、哌啶基等。

101、術(shù)語“芳基”是指具有指定的碳原子數(shù)（例如c6~c10）的、僅由碳原子組成的環(huán)狀基團，其為單環(huán)或多環(huán)，且至少一個環(huán)具有芳香性（符合休克爾規(guī)則）。芳基通過具有芳香性的環(huán)或不具有芳香性的環(huán)與分子中的其他片段連接。芳基包括但不限于苯基、萘基等。

102、術(shù)語“雜芳基”是指具有指定環(huán)原子數(shù)（例如5~10元）的、指定雜原子數(shù)（例如1個、2個或3個）的、指定雜原子種類（n、o和s中的一種或多種）的環(huán)狀基團，其為單環(huán)或多環(huán)，且至少一個環(huán)具有芳香性（符合休克爾規(guī)則）。雜芳基通過具有芳香性的環(huán)或不具有芳香性的環(huán)與分子中的其他片段連接。雜芳基包括但不限于呋喃基、吡咯基、噻吩基、吡唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吲哚基等。

103、術(shù)語“藥學上可接受的鹽”是指化合物與藥學上可接受的（相對無毒、安全、適合于患者使用）酸或堿反應得到的鹽。當化合物中含有相對酸性的官能團時，可以通過在合適的惰性溶劑中用足量的藥學上可接受的堿與化合物的游離形式接觸的方式獲得堿加成鹽。藥學上可接受的堿加成鹽包括但不限于鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽、鋁鹽、鎂鹽、鉍鹽、銨鹽等。當化合物中含有相對堿性的官能團時，可以通過在合適的惰性溶劑中用足量的藥學上可接受的酸與化合物的游離形式接觸的方式獲得酸加成鹽。藥學上可接受的酸加成鹽包括但不限于鹽酸鹽、硫酸鹽、甲磺酸鹽等。

104、術(shù)語“藥用輔料”是指生產(chǎn)藥品和調(diào)配處方時使用的賦形劑和附加劑，是除活性成分以外，包含在藥物制劑中的所有物質(zhì)。

105、在符合本領(lǐng)域常識的基礎(chǔ)上，上述各優(yōu)選條件，可任意組合，即得本發(fā)明各較佳實例。

106、本發(fā)明所用試劑和原料均市售可得。

107、本發(fā)明的積極進步效果在于：本發(fā)明提供了一類結(jié)構(gòu)新穎的抗體藥物偶聯(lián)物，能夠抑制腫瘤細胞的增殖，具有較好的體內(nèi)抗腫瘤活性。