本發(fā)明涉及一種e5多肽功能化的鉑納米酶的制備方法及其應(yīng)用，屬于納米醫(yī)學(xué)。

背景技術(shù)：

1、淋巴瘤作為一種在全球范圍內(nèi)發(fā)病率位居前十的惡性腫瘤，其治療歷史可以追溯到20世紀(jì)40年代，當(dāng)時(shí)氮芥首次被用于治療該疾病。1997年，美國食品藥品監(jiān)督管理局(fda)批準(zhǔn)了利妥昔單抗用于治療復(fù)發(fā)或難治性b細(xì)胞淋巴瘤，這標(biāo)志著淋巴瘤靶向治療時(shí)代的開啟。2016年，fda批準(zhǔn)了pd-1抑制劑用于治療霍奇金淋巴瘤(hl)。2018年，fda批準(zhǔn)了car-t細(xì)胞療法用于治療復(fù)發(fā)或難治性大b細(xì)胞淋巴瘤，這開啟了淋巴瘤免疫和細(xì)胞治療的新紀(jì)元。目前現(xiàn)有的這些治療策略在一定程度上取得了療效，但仍有一些患者在標(biāo)準(zhǔn)治療方案后出現(xiàn)復(fù)發(fā)，導(dǎo)致進(jìn)一步治療困難，預(yù)后較差。納米醫(yī)學(xué)作為一種新興治療方式，已證明在提高藥物生物利用度和減少毒性方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。納米醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步為多種重大疾病的治療(包括淋巴瘤)提供了新的治療途徑。特別是，納米技術(shù)在血癌治療中的靶向性應(yīng)用，已成為針對(duì)此類惡性腫瘤的一種充滿潛力的治療策略。

2、納米酶在腫瘤治療領(lǐng)域展現(xiàn)出顯著的應(yīng)用潛力，其能夠雙向調(diào)節(jié)活性氧(ros)水平，對(duì)維持生物體氧化還原平衡具有關(guān)鍵作用。在特定微環(huán)境下，納米酶能夠干預(yù)并調(diào)控生物體內(nèi)的催化過程，為多種疾病的診斷與治療提供了新的策略，尤其在癌癥治療中扮演著至關(guān)重要的角色。特別是，鉑基納米酶在腫瘤的化學(xué)動(dòng)力學(xué)治療、光動(dòng)力治療、光熱治療、聲動(dòng)力治療以及放療增敏方面展現(xiàn)出顯著效果。然而，由于對(duì)腫瘤特異性不足，其在體內(nèi)的治療效果受到一定限制。

3、趨化因子受體4(cxcr4)，作為g蛋白耦聯(lián)受體(gpcrs)家族中的一個(gè)關(guān)鍵成員，在至少23種不同類型人類癌癥中呈現(xiàn)高表達(dá)現(xiàn)象，涵蓋了乳腺癌、白血病等惡性腫瘤。cxcr4與其同源配體cxcl12(亦稱為基質(zhì)衍生因子1α，sdf-1α)的結(jié)合，在調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的定向遷移、侵襲和轉(zhuǎn)移過程中扮演著至關(guān)重要的角色。cxcr4-cxcl12生物軸與腫瘤的起始、發(fā)展緊密相關(guān)，因此，阻斷該生物軸可能為腫瘤免疫治療提供新的思路。已有研究證實(shí)cxcr4-cxcl12參與了彌漫大b細(xì)胞淋巴瘤(dlbcl)的發(fā)病機(jī)制，故阻斷cxcr4-cxcl12生物軸被認(rèn)為是淋巴瘤治療的潛在靶點(diǎn)。目前，全球市場(chǎng)上僅有普樂沙福(plerixafor)和莫替福肽(mocetinostat)兩種cxcr4拮抗劑獲批上市。同時(shí)，有超過20種cxcr4拮抗劑正處于研發(fā)階段，這些候選藥物包括小分子化合物、多肽和抗體，旨在治療多種癌癥。有研究報(bào)告指出，e5多肽能夠有效阻斷cxcr4/cxcl12軸，并在急性髓細(xì)胞白血病(aml)小鼠模型中增強(qiáng)化療藥物的療效，以及在乳腺癌小鼠模型中提升多種化療藥物的治療效果。這些發(fā)現(xiàn)為cxcr4拮抗劑在癌癥治療中的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)，并為未來的藥物開發(fā)指明了方向。

4、免疫原性細(xì)胞死亡(immunogenic?cell?death,icd)是一種前沿的抗腫瘤治療策略，它專門針對(duì)那些對(duì)傳統(tǒng)治療手段如化療和放療不敏感的繼發(fā)性腫瘤。icd誘導(dǎo)劑能夠誘發(fā)癌細(xì)胞的免疫原性死亡，進(jìn)而激發(fā)全身性的免疫應(yīng)答。目前，一系列有機(jī)化合物，包括阿霉素(doxorubicin)、環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide)、博來霉素(bleomycin)、地高辛(digoxin)、薩他西丁(saharitine)和米托蒽醌(mitoxantrone)等，已被鑒定為潛在的icd誘導(dǎo)劑。特別地，阿霉素和環(huán)磷酰胺作為彌漫大b細(xì)胞淋巴瘤(dlbcl)的常規(guī)化療藥物，其icd誘導(dǎo)潛力受到了廣泛關(guān)注。此外，金屬基化合物作為新型治療劑的研究也在不斷增加，涵蓋了鉑(platinum,pt)、金(gold,au)、銅(copper,cu)、釕(ruthenium,ru)和銥(iridium,ir)等金屬配合物。其中，鉑配合物在全球化療中的使用率超過了50％。盡管這些金屬配合物在體外癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)和小鼠模型中展現(xiàn)出了良好的icd誘導(dǎo)效果，但它們?cè)谒幚韺W(xué)特性上仍存在不足，尤其是在腫瘤組織的靶向性和結(jié)構(gòu)-活性關(guān)系方面。為了解決這些問題，將能夠誘導(dǎo)icd的金屬納米酶偶聯(lián)到具有活性的腫瘤靶向部分(例如抗體、多肽)中，被認(rèn)為有望提高治療效果。

5、盡管納米酶在腫瘤治療領(lǐng)域已顯示出初步潛力，但其臨床應(yīng)用的有效性和可行性尚未得到充分評(píng)估。雖然有關(guān)癌癥治療的納米顆粒研究文獻(xiàn)豐富，但獲得fda批準(zhǔn)的納米顆粒種類有限，這導(dǎo)致納米醫(yī)學(xué)領(lǐng)域臨床應(yīng)用與學(xué)術(shù)產(chǎn)出之間存在嚴(yán)重脫節(jié)，這在一定程度上歸因于納米酶材料設(shè)計(jì)和制備過程的復(fù)雜性。因此，為了推動(dòng)納米酶在淋巴瘤治療中的應(yīng)用，必須優(yōu)化納米酶的合成過程，以實(shí)現(xiàn)納米顆粒的高效合成和順利的臨床轉(zhuǎn)化。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是提供了一種e5多肽功能化的鉑納米酶的制備方法。該鉑納米酶采用一步合成法制備，可實(shí)現(xiàn)對(duì)與cxcr4-cxcl12生物軸相關(guān)疾病的精準(zhǔn)靶向治療。

2、技術(shù)方案：本發(fā)明提供了一種e5多肽功能化的鉑納米酶的制備方法，所述方法包括以下步驟：將鉑前驅(qū)體溶液和修飾有半胱氨酸的多肽e5溶液混合，再在超聲條件下邊機(jī)械攪拌邊滴加硼氫化鈉溶液，反應(yīng)結(jié)束后進(jìn)行超濾，純水洗滌，即得e5多肽功能化的鉑納米酶。

3、進(jìn)一步地，所述鉑前驅(qū)體溶液為氯鉑酸溶液。

4、進(jìn)一步地，所述氯鉑酸溶液的摩爾濃度為18-20mm。

5、進(jìn)一步地，所述多肽e5溶液摩爾濃度為0.03-0.05mm。

6、進(jìn)一步地，所述硼氫化鈉溶液的摩爾濃度為263-265mm。

7、進(jìn)一步地，所述h2ptcl6·6h2o溶液、多肽e5溶液和硼氫化鈉溶液的體積比為1：8：1。

8、進(jìn)一步地，所述機(jī)械攪拌的速度為900～1100rpm，反應(yīng)溫度為20-30℃，超聲功率為90～110w。

9、進(jìn)一步地，所述超濾的離心管分子量為30kda，離心速度為1000～3000rpm，離心時(shí)間為5～15min，離心次數(shù)為3～5次。

10、本發(fā)明還提供了上述e5多肽功能化的鉑納米酶的制備方法制備得到鉑納米酶。

11、本發(fā)明還提供了上述鉑納米酶在制備治療與cxcr4-cxcl12生物軸相關(guān)疾病的藥物中的應(yīng)用。

12、進(jìn)一步地，所述與cxcr4-cxcl12生物軸相關(guān)疾病包括急性髓細(xì)胞白血病、乳腺癌或淋巴瘤。

13、有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下突出的顯著優(yōu)點(diǎn)：本發(fā)明制備工藝簡(jiǎn)單，易于純化，具有良好的發(fā)展前景。本發(fā)明制備的納米酶具有良好的穩(wěn)定性，水溶性及生物相容性，可在腫瘤微環(huán)境靶向治療，有效降低了對(duì)正常細(xì)胞的毒副作用，為構(gòu)建安全、智能、高效的納米酶藥物提供了新思路。本發(fā)明的納米酶可以通過鉑納米酶實(shí)現(xiàn)“芬頓反應(yīng)”，破壞細(xì)胞內(nèi)的氧化還原平衡并進(jìn)一步引起免疫原性死亡。本發(fā)明的納米酶通過尾靜脈注射進(jìn)入b細(xì)胞淋巴瘤小鼠體內(nèi)后，具有顯著的抗腫瘤效果，可以實(shí)現(xiàn)化學(xué)動(dòng)力學(xué)/免疫原性死亡，e5多肽還能夠阻斷cxcr4-cxcl12生物軸，阻止腫瘤細(xì)胞對(duì)骨髓的浸潤，具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。