本公開涉及新型多特異性抗體，該多特異性抗體包含能夠與第一抗原結合的第一工具；以及能夠與特定組織上(例如血腦屏障上)的第二抗原結合的第二工具。

背景技術：

1、已經(jīng)研究了許多方法來改善治療性單克隆抗體(mab)的遞送。例如，雖然血腦屏障(bbb)阻止有害物質進入腦并且對于腦穩(wěn)態(tài)是必需的，但是它對于將藥物有效地遞送至腦構成了難以克服的障礙。大分子諸如單克隆抗體和其他生物治療劑對于治療/檢測中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)中的病理具有巨大的治療/診斷潛力。然而，它們進入腦中的途徑被bbb阻止。抗轉鐵蛋白受體1(tfr1)單克隆抗體已用于將藥物遞送至腦(burkhart等人，progress?inneurobiology，第181卷，第101665頁，2019年)。然而，抗tfr1單克隆抗體的安全性傾向和不良藥代動力學(pk)阻礙了它們作為bbb載劑的臨床開發(fā)。

2、因此，需要一種平臺，該平臺可用于將藥物有效地且以改善的安全性和藥代動力學穿梭移動到靶組織中。

技術實現(xiàn)思路

1、在一個方面，本文提供了一種多特異性抗體或其抗原結合片段，該多特異性抗體或其抗原結合片段包含各自能夠特異性結合到人表皮生長因子受體2(her2)的第一抗原結合區(qū)和第二抗原結合區(qū)中的至少一者、以及能夠特異性結合到轉鐵蛋白受體(tfr)的第三抗原結合區(qū)。

2、在某些實施方案中，第一抗原結合區(qū)包含第一重鏈可變區(qū)(vh1)，該vh1包含重鏈互補決定區(qū)1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3，它們分別包含seq?id?no:5、6和7的氨基酸序列；以及第一輕鏈可變區(qū)(vl1)，所述vl1包含輕鏈互補決定區(qū)1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3，它們分別包含seq?id?no:8、9和10的氨基酸序列；第二抗原結合區(qū)包含第二重鏈可變區(qū)(vh2)，該vh2包含重鏈互補決定區(qū)1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3，它們分別包含seq?id?no:13、14和15的氨基酸序列；以及第二輕鏈可變區(qū)(vl2)，所述vl2包含輕鏈互補決定區(qū)1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3，它們分別包含seq?id?no:16、17和18的氨基酸序列；并且第三抗原結合區(qū)包含第一單鏈可變片段(scfv1)，該scfv1具有：包含重鏈互補決定區(qū)1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3的第三重鏈可變區(qū)(vh3)，以及包含輕鏈互補決定區(qū)1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3的第三輕鏈可變區(qū)(vl3)，其中該hcdr1、hcdr2、hcdr3、lcdr1、lcdr2和lcdr3具有表2的氨基酸序列中的任一者。

3、在某些實施方案中，vh1包含與如seq?id?no:1所示的hc序列的vh相同的氨基酸序列；并且vl1包含與如seq?id?no:2所示的lc序列的vl相同的氨基酸序列；vh2包含與如seqid?no:11所示的hc序列的vh相同的氨基酸序列；vl2包含與如seq?id?no:12所示的lc序列的vl相同的氨基酸序列；并且vh3和vl3包含與如以下各項所示的scfv的相應vh和vl相同的氨基酸序列：

4、(i)seq?id?no:19；

5、(ii)?seq?id?no:26；

6、(iii)?seq?id?no:33；

7、(iv)?seq?id?no:40；

8、(v)seq?id?no:47；

9、(vi)?seq?id?no:54；

10、(vii)?seq?id?no:59；

11、(viii)seq?id?no:66；

12、(ix)?seq?id?no:72；

13、(x)seq?id?no:79；

14、(xi)?seq?id?no:82；

15、(xii)?seq?id?no:85；

16、(xiii)seq?id?no:87；

17、(xiv)?seq?id?no:94；

18、(xv)?seq?id?no:101；

19、(xvi)?seq?id?no:104；

20、(xvii)seq?id?no:111；

21、(xviii)seq?id?no:118；

22、(xix)?seq?id?no:125；

23、(xx)?seq?id?no:132；

24、(xxi)?seq?id?no:138；

25、(xxii)seq?id?no:144；

26、(xxiii)seq?id?no:150；

27、(xxiv)seq?id?no:155；

28、(xxv)seq?id?no:158；

29、(xxvi)seq?id?no:164；

30、(xxvii)seq?id?no:169；

31、(xxviii)seq?id?no:175；

32、(xxix)seq?id?no:183；

33、(xxx)seq?id?no:188；

34、(xxxi)seq?id?no:193；

35、(xxxii)seq?id?no:198；或

36、(xxxiii)sed?id?no:204。

37、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含vh1、含有第一fc區(qū)(fc1)的第一重鏈恒定區(qū)和scfv1的第一重鏈(hc1)，以及(b)包含vl1和輕鏈恒定區(qū)的第一輕鏈(lc1)。

38、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含vh1和含有第二fc區(qū)(fc2)的第一重鏈恒定區(qū)的第二重鏈(hc2)，以及(b)包含vl1和輕鏈恒定區(qū)的第二輕鏈(lc2)。

39、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段還包含第二fc區(qū)(fc2)。

40、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含vh2和含有第一fc區(qū)(fc1)的第一重鏈恒定區(qū)的第一重鏈(hc1)，(b)包含vl2和輕鏈恒定區(qū)的第一輕鏈(lc1)。以及(c)包含scfv1和含有第二fc區(qū)(fc2)的第二重鏈恒定區(qū)的第二重鏈(hc2)。

41、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含第一抗原結合區(qū)、第二抗原結合區(qū)和第三抗原結合區(qū)。

42、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含vh1、含有第一fc區(qū)(fc1)的第一重鏈恒定區(qū)和scfv1的第一重鏈(hc1)，(b)包含vl1和輕鏈恒定區(qū)的第一輕鏈(lc1)。以及(c)包含第二單鏈可變片段(scfv2)和含有第二fc區(qū)(fc2)的第一重鏈恒定區(qū)的第二重鏈(hc2)，其中scfv2包含vh2和vl2。

43、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含：(a)包含vh2、含有第一fc區(qū)(fc1)的第一重鏈恒定區(qū)和scfv1的第一重鏈(hc1)，(b)包含vl2和輕鏈恒定區(qū)的第一輕鏈(lc1)。以及(c)包含第二單鏈可變片段(scfv2)和含有第二fc區(qū)(fc2)的第一重鏈恒定區(qū)的第二重鏈(hc2)，其中scfv2包含vh1和vl1。

44、在某些實施方案中，scfv1和/或scfv2包含以下中的至少一者：(a)結構保守的表面暴露的vh半胱氨酸(cys)與第一l?cys之間的第一二硫鍵；以及b)結構保守的表面暴露的vl?cys和第二l?cys之間的第二二硫鍵。

45、在某些實施方案中，scfv1和scfv2各自獨立地包含第一二硫鍵和第二二硫鍵。

46、在某些實施方案中，scfv2包含具有seq?id?no:3或4的氨基酸序列的氨基酸序列。

47、在某些實施方案中，scfv1包含選自由以下組成的組的氨基酸序列：seq?id?no:19、26、33、40、47、54、59、66、72、79、82、83、84、85、86、87、94、101、104、111、118、125、132、138、144、150、155、158、164、169、175、183、188、193、198和204。

48、在某些實施方案中，fc1和fc2各自包含一個或多個異二聚體突變、或一個或多個旋鈕和孔突變。

49、在某些實施方案中，該異二聚體突變包含在fc1和fc2中的一者中的位置t350、l351、f405和y407處的氨基酸修飾、以及在fc1和fc2中的另一者中的位置t350、t366、k392和t394處的氨基酸修飾，其中位置t350處的氨基酸修飾是t350v、t350i、t350l或t350m；位置l351處的氨基酸修飾是l351y；位置f405處的氨基酸修飾是f405a、f405v、f405t或f405s；位置y407處的氨基酸修飾是y407v、y407a或y407i；位置t366處的氨基酸修飾是t366l、t366i、t366v或t366m，位置k392處的氨基酸修飾是k392f、k392l或k392m，并且位置t394處的氨基酸修飾是t394w，并且其中根據(jù)如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號。

50、在某些實施方案中，fc1和fc2中的一者包含突變t350v、l351y、f405a和y407v，并且fc1和fc2中的另一者包含突變t350v、t366l、k392l和t394w。

51、在某些實施方案中，fc1和fc2各自包含一個或多個旋鈕和孔突變。

52、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含具有氨基酸修飾的fc結構域，該氨基酸修飾增強多特異性抗體或其抗原結合片段與新生兒fc受體(rcrn)的結合，優(yōu)選地該氨基酸修飾增強在酸性ph下的結合，更優(yōu)選地該fc結構域具有m252y/s254t/t256e(yte)突變，其中根據(jù)如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號。

53、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含具有減少或消除效應子功能的氨基酸修飾的fc結構域，優(yōu)選地該fc結構域具有位置l234、l235、d265、d270、n297、e318、k320、k322、p331和p329處的一個或多個氨基酸修飾，諸如l234a、l235a、d265s和p331s中的一個、兩個、三個或四個氨基酸修飾，其中根據(jù)如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號。

54、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含具有m252y、s254t、t256e、l234a、l235a和d265s中的一個或多個氨基酸修飾的fc結構域，其中根據(jù)如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號。

55、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含不具有減少或消除效應子功能的氨基酸修飾的fc結構域。

56、還提供了一種多特異性抗體，該多特異性抗體包含各自具有與以下各項至少90％相同的氨基酸序列的第一重鏈、輕鏈和第二重鏈：(a)分別為seq?id?no:211、seq?id?no:12和seq?id?no:212；或(b)分別為seq?id?no:213、seq?id?no:12和seq?id?no:214；

57、其中所述第一抗原結合區(qū)能夠特異性結合到her2的第一表位，所述第二抗原結合區(qū)能夠特異性結合到her2的第二表位，并且所述第三抗原結合區(qū)能夠特異性結合到tfr。

58、在某些實施方案中，第一重鏈、輕鏈和第二重鏈各自包含以下各項的氨基酸序列：(a)分別為seq?id?no:211、seq?id?no:12和seq?id?no:212；或(b)分別為seq?id?no:213、seq?id?no:12和seq?id?no:214。

59、本技術的另一個總的方面涉及一種分離的核酸序列，該分離的核酸序列編碼根據(jù)本技術的多特異性抗體或其抗原結合片段。還提供了一種包含本技術的分離的核酸的載體、以及一種包含本技術的分離的核酸或載體的宿主細胞。

60、本技術的另一個總的方面涉及一種產生多特異性抗體或其抗原結合片段的方法。該方法包括在產生多特異性抗體或其抗原結合片段的條件下培養(yǎng)包含本技術的核酸的細胞，以及回收多特異性抗體或其抗原結合片段。

61、還提供了一種藥物組合物，該藥物組合物包含本技術的多特異性抗體或其抗原結合片段以及藥學上可接受的載劑。

62、本發(fā)明的另一個總的方面涉及一種治療或檢測有需要的受試者中的障礙(優(yōu)選地癌癥)的方法，該方法包括向該受試者施用本技術的多特異性抗體或抗原結合片段或藥物組合物。

63、根據(jù)以下公開內容，包括本發(fā)明的詳細描述和其優(yōu)選的實施方案以及所附權利要求書，本發(fā)明的其他方面、特征和優(yōu)點將顯而易見。