本發(fā)明涉及微生物，更具體地說，它涉及一種副干酪乳酪桿菌gp66及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、副干酪乳酪桿菌(lacticaseibacillus?paracasei)，是一株典型的革蘭氏陽性菌株，具有多種益生功能，廣泛分布于人體腸道、口腔、陰道以及乳制品中，常被用于工業(yè)制作食品發(fā)酵劑、生物制藥以及功能性益生菌補充劑。研究表明，副干酪乳酪桿菌具有多種生理功能，如副干酪乳酪桿菌lp33，能夠在腸道內(nèi)快速生長繁殖，有效抑制有害菌的生長，促進有益菌的增殖，從而更好地維持腸道微生態(tài)的穩(wěn)定；副干酪乳酪桿菌imc-4，能有效降低有害物質(zhì)進入腸道黏膜引發(fā)炎癥的風(fēng)險，可以顯著增強腸道上皮細胞之間的緊密連接，減少腸道通透性；副干酪乳酪桿菌lpb27，能夠顯著誘導(dǎo)小鼠原代脾細胞中白細胞介素10(il-10)和腫瘤壞死因子-α(tnf-α)mrna的表達以及多種細胞因子的分泌，增強免疫細胞的活性。除此之外，不同的副干酪乳酪桿菌對胃酸以及腸液的耐受性不同，其腸道定制能力也會有差異。總體而言，副干酪乳酪桿菌不僅能維穩(wěn)腸道菌群，保護腸道屏障，還能在免疫修復(fù)以及代謝調(diào)節(jié)等方面發(fā)揮作用。

2、γ-氨基丁酸(gaba)，是一種四碳非蛋白氨基酸，是大多數(shù)生物游離氨基酸中不可缺少的重要部分，具有多種生理功能，如抗抑郁、利尿和鎮(zhèn)靜作用。作為一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì)，gaba在調(diào)控中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元興奮和抑制的平衡中起著關(guān)鍵作用，其三種受體(gabaa、gabab和gabac)上的變構(gòu)位點可以高精度地調(diào)節(jié)大腦相關(guān)區(qū)域中神經(jīng)元的抑制水平，這些位點同時也是催眠藥物的分子靶點。研究發(fā)現(xiàn)，給小鼠灌食不同劑量的酸棗仁提取物、gaba、龍眼肉提取物和酪蛋白水解物復(fù)配制劑4周后，低中高劑量的復(fù)配劑均可顯著延長戊巴比妥鈉誘導(dǎo)的小鼠睡眠時間。目前很少有研究探討gaba的其他潛在生理功能，而近年來，越來越多的研究表明gaba對肥胖及其并發(fā)癥(如高血脂、高血糖和脂肪肝等)同樣具有顯著的改善效果。得益于微生物學(xué)的發(fā)展，相比于化學(xué)合成，微生物發(fā)酵法富集gaba更加安全且成本較低，目前常用于生產(chǎn)gaba的微生物有酵母菌和乳酸菌。此外，菌株的菌種、來源以及培養(yǎng)條件等因素都會影響到菌株gaba的產(chǎn)量。當(dāng)前研究發(fā)現(xiàn)的高產(chǎn)gaba乳酸菌多種多樣，如專利cn118497086b從中國遼寧地區(qū)生產(chǎn)的泡菜樣品中分離篩選到一株植物乳植桿菌nj01，并且發(fā)現(xiàn)該菌株不僅高產(chǎn)gaba，還具有降解膽固醇和降血糖等多種生理功能；同時，專利cn115521889b在廣西長壽村人群的腸道中篩選到一株產(chǎn)gaba的植物乳桿菌wl02，gaba產(chǎn)量為501.86mg/100ml，并提供了一種富含gaba的谷物飲料的制備方法。由此可見，產(chǎn)gaba益生菌可作為理想的功能食品原料，添加到各類食品中，如酸奶、飲料、烘焙食品等，開發(fā)出有助于緩解焦慮、改善睡眠、調(diào)節(jié)血壓等功能的創(chuàng)新食品，并且產(chǎn)gaba益生菌能夠通過調(diào)節(jié)腸道菌群，增加腸道內(nèi)gaba的產(chǎn)生和吸收，進而影響大腦中g(shù)aba的水平，有望在食品領(lǐng)域發(fā)揮重要作用。

3、目前，高產(chǎn)gaba的菌株多為植物乳植桿菌和短乳桿菌，專利cn116286519b從泡菜中篩選到一株副干酪乳酪桿菌ks3并闡述了其在抗衰老和助消化食品藥品中的應(yīng)用，然而副干酪乳酪桿菌ks3的gaba含量僅有95.13pg/ml，相較于植物乳植桿菌來說含量較低。因此，本發(fā)明從菌株來源以及培養(yǎng)條件等多個方面出發(fā)，篩選一株具有優(yōu)良益生功能的產(chǎn)gaba副干酪乳酪桿菌gp66。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、針對現(xiàn)有技術(shù)存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種副干酪乳酪桿菌gp66及其應(yīng)用，該菌株具有高產(chǎn)gaba的特殊生理功能并能成功降低高脂飲食小鼠血脂和血糖，具有多種潛在作用功能。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下技術(shù)方案：

3、一種副干酪乳酪桿菌(lacticaseibacillus?paracasei)gp66，所述副干酪乳酪桿菌gp66保藏編號為cgmcc?no.32952，該菌株在保藏時是存活的。

4、一種發(fā)酵物，通過所述的副干酪乳酪桿菌gp66發(fā)酵制得。

5、一種發(fā)酵方法，將所述的副干酪乳酪桿菌gp66在mrs固體培養(yǎng)基上接種后挑取單菌液體活化，活化后接種至液體培養(yǎng)基中發(fā)酵。

6、進一步優(yōu)選為：活化后接種3％副干酪乳酪桿菌gp66至液體培養(yǎng)基中。

7、進一步優(yōu)選為：發(fā)酵時間為16h；發(fā)酵溫度為37℃。

8、進一步優(yōu)選為：所述液體培養(yǎng)基包括以下含量的組分：酪蛋白酶消化物10.0g/l、牛肉膏粉10.0g/l、酵母膏粉4.0g/l、檸檬酸三銨2.0g/l、乙酸鈉5.0g/l、硫酸鎂0.2g/l、硫酸錳0.05g/l、葡萄糖20.0g/l和吐溫1.0g/l。

9、進一步優(yōu)選為：所述mrs固體培養(yǎng)基包括以下含量的組分：酪蛋白酶消化物10.0g/l、牛肉膏粉10.0g/l、酵母膏粉4.0g/l、檸檬酸三銨2.0g/l、乙酸鈉5.0g/l、硫酸鎂0.2g/l、硫酸錳0.05g/l、葡萄糖20.0g/l、吐溫1.0g/l和瓊脂15g/l。

10、一種益生菌制劑，包括所述的副干酪乳酪桿菌gp66。

11、一種益生菌制劑的應(yīng)用，應(yīng)用于制備助眠的藥物；或者

12、應(yīng)用于制備降血脂的藥物；或者

13、應(yīng)用于制備降血糖的藥物。

14、一種益生菌制劑的應(yīng)用，應(yīng)用于制備促進glut4、irs1和/或pparα表達的藥物；或者

15、應(yīng)用于制備抑制srebp-1c表達的藥物。

16、綜上所述，本發(fā)明具有以下有益效果：

17、(1)本發(fā)明從泡菜水中分離出一株副干酪乳酪桿菌gp66，該菌株具有高產(chǎn)gaba的能力，并有較好的耐酸耐膽鹽能力和抑菌能力。

18、(2)本發(fā)明中的副干酪乳酪桿菌gp66可以顯著延長睡眠剝奪小鼠的睡眠時長，并降低睡眠剝奪小鼠下丘腦中炎癥因子水平和升高睡眠剝奪小鼠下丘腦中5-ht水平；

19、(3)本發(fā)明中的副干酪乳酪桿菌gp66對肥胖小鼠的糖脂代謝紊亂具有改善功能，可以降低肥胖小鼠的血糖水平和血脂水平；

20、(4)本發(fā)明中的副干酪乳酪桿菌gp66可以恢復(fù)糖脂代謝相關(guān)基因glut4、irs1和pparα的表達，并能顯著抑制srebp-1c基因的表達。

21、本發(fā)明優(yōu)化了副干酪乳酪桿菌gp66的產(chǎn)gaba的發(fā)酵條件，在此條件下發(fā)酵液中的gaba含量為10.19g/l。本發(fā)明的副干酪乳酪桿菌gp66可以顯著延長小鼠的睡眠時間，并改善高脂飲食小鼠的糖脂代謝紊亂，具有良好的應(yīng)用前景。

22、保藏說明：

23、中文學(xué)名：副干酪乳酪桿菌；

24、分類命名：副干酪乳酪桿菌lacticaseibacillus?paracasei；

25、菌株編號：gp66；

26、保藏編號：cgmcc?no.32952；

27、保藏時間：2024年12月20日；

28、保藏機構(gòu)：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心；

29、保藏地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，郵編100101。