本發(fā)明涉及基因工程，特別是涉及glyma.11g239200基因在鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、大豆是重要的糧食作物以及油料作物，對我國的作物發(fā)展具有重要的經(jīng)濟價值。隨著全球環(huán)境變化和人口的持續(xù)增長，人們對豆類作物的需求不斷增加，但與其他作物產(chǎn)量相比大豆產(chǎn)量還是較低的，因此提高豆類作物產(chǎn)量成為需要攻克的重大難題。

2、大豆是一種自花授粉作物，通過人工異花授粉來生產(chǎn)大量雜交種子十分困難，而雄性不育為雜種優(yōu)勢的利用提供了新思路和重要材料，可以采用雄性不育突變體來制備大豆雜交種子。有助于加速大豆育種的進程。因此，亟需挖掘大豆的不育基因，來應(yīng)用于大豆種子生產(chǎn)和作物改良。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是提供glyma.11g239200基因在鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用，以解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題。本發(fā)明篩選得到了與大豆不育突變體相關(guān)的glyma.11g239200基因，并鑒定到該基因33350509bp處存在t/a突變。經(jīng)過kasp標記驗證實驗證實，glyma.11g239200基因的突變類型可以影響大豆的育性，能夠鑒定大豆不育突變體植株，為大豆種子生產(chǎn)和作物改良提供了技術(shù)支持。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了如下方案：

3、本發(fā)明提供一種與大豆育性相關(guān)的glyma.11g239200基因，所述glyma.11g239200基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

4、本發(fā)明還提供一種用于鑒定大豆育性的分子標記，所述分子標記的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，在所述核苷酸序列的第12位堿基處存在t/a突變；

5、所述分子標記的參考基因組為wm82.a2.v1基因組。

6、本發(fā)明還提供上述分子標記在早期鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用。

7、本發(fā)明還提供一種用于檢測上述分子標記的kasp引物組，所述kasp引物組包括如seq?id?no.4所示的上游引物glyma.11g239200_f、如seq?id?no.5所示的上游引物glyma.11g239200_h和如seq?id?no.6所示的下游引物glyma.11g239200_r。

8、本發(fā)明還提供一種用于檢測上述分子標記的試劑盒，所述試劑盒中包含上述kasp引物組。

9、本發(fā)明還提供上述kasp引物組或上述試劑盒在早期鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用。

10、本發(fā)明還提供一種早期鑒定大豆不育突變體的方法，包括如下步驟：

11、以待測大豆植株的基因組dna作為模板，利用上述kasp引物組或上述試劑盒對模板進行pcr擴增，pcr擴增完成后讀取熒光信號，解析轉(zhuǎn)換熒光信號，鑒定基因型，根據(jù)基因型判斷待測大豆植株的育性；

12、若鑒定的基因型為tt基因型，則判斷待測大豆植株為可育植株；若鑒定的基因型為aa基因型，則判斷待測大豆植株為不育突變植株。

13、進一步地，所述pcr擴增的反應(yīng)體系為10μl：dna模板1μl、kasp?pcr?mix?5μl、引物混合物0.14μl、ddh2o?3.86μl；

14、所述引物混合物由30μm上游引物glyma.11g239200_f、30μm上游引物glyma.11g239200_h和90μm下游引物glyma.11g239200_r按照體積比1:1:1混合得到。

15、進一步地，所述pcr擴增的反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性15min；94℃變性20s、61-55℃復(fù)性/延伸60s，共10個循環(huán)，每次循環(huán)降低0.6℃；94℃變性20s、55℃復(fù)性/延伸60s，共26個循環(huán)。

16、本發(fā)明還提供上述kasp引物組或上述試劑盒在分子標記輔助選育大豆不育突變體中的應(yīng)用。

17、本發(fā)明公開了以下技術(shù)效果：

18、本發(fā)明采用基于bsa-seq法對導(dǎo)致產(chǎn)生大豆不育突變體的基因進行篩選，篩選得到了與大豆不育突變體相關(guān)的glyma.11g239200基因，并鑒定到該基因33350509bp處存在t/a突變。經(jīng)過kasp標記驗證實驗證實，glyma.11g239200基因的突變類型可以影響大豆的育性，根據(jù)該位點設(shè)計kasp引物，能夠鑒定大豆不育突變體植株，為大豆種子生產(chǎn)和作物改良提供了技術(shù)支持。

技術(shù)特征：

1.一種與大豆育性相關(guān)的glyma.11g239200基因，其特征在于，所述glyma.11g239200基因的核苷酸序列如seq?id?no.1所示。

2.一種用于鑒定大豆育性的分子標記，其特征在于，所述分子標記的核苷酸序列如seqid?no.1所示，在所述核苷酸序列的第12位堿基處存在t/a突變；

3.權(quán)利要求2所述的分子標記在早期鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用。

4.一種用于檢測權(quán)利要求2所述分子標記的kasp引物組，其特征在于，所述kasp引物組包括如seq?id?no.4所示的上游引物glyma.11g239200_f、如seq?id?no.5所示的上游引物glyma.11g239200_h和如seq?id?no.6所示的下游引物glyma.11g239200_r。

5.一種用于檢測權(quán)利要求2所述分子標記的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包含權(quán)利要求4所述的kasp引物組。

6.權(quán)利要求4所述的kasp引物組或權(quán)利要求5所述的試劑盒在早期鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用。

7.一種早期鑒定大豆不育突變體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述pcr擴增的反應(yīng)體系為10μl：dna模板1μl、kasp?pcr?mix?5μl、引物混合物0.14μl、ddh2o?3.86μl；

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述pcr擴增的反應(yīng)程序為：94℃預(yù)變性15min；94℃變性20s、61-55℃復(fù)性/延伸60s，共10個循環(huán)，每次循環(huán)降低0.6℃；94℃變性20s、55℃復(fù)性/延伸60s，共26個循環(huán)。

10.權(quán)利要求4所述的kasp引物組或權(quán)利要求5所述的試劑盒在分子標記輔助選育大豆不育突變體中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了Glyma.11g239200基因在鑒定大豆不育突變體中的應(yīng)用，屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域。所述Glyma.11g239200基因的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。本發(fā)明篩選得到了與大豆不育突變體相關(guān)的Glyma.11g239200基因，并鑒定到該基因在33350509bp處存在T/A突變。經(jīng)過KASP標記驗證實驗證實，Glyma.11g239200基因的突變類型可以影響大豆的育性，能夠鑒定大豆不育突變體植株，為大豆種子生產(chǎn)和作物改良提供了技術(shù)支持。

技術(shù)研發(fā)人員：杜吉到,張琦,陳天宇,張文慧,陳澤昊,李江輝,歷安建,邸泓利,周藝璇,李威,黃長超,張旭,楊子毅
受保護的技術(shù)使用者：黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2025/6/12