本發(fā)明屬于纖溶酶制備，具體涉及一種富含纖溶酶的基質(zhì)及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、血栓是指在一定條件下，身體內(nèi)的血液成分在血管內(nèi)形成栓塊，造成血栓。作為侵害人類生命和健康的主要疾病之一，血栓性疾病不但患病率較高，同時，其致死率也居高不下。由于人們生活方式的不斷改變，生活水平的不斷提高，人們在日常飲食中高蛋白以及高脂肪的攝取過度，促使血栓性疾病的發(fā)病率增加。
2、目前臨床上最常用的溶栓藥物是組織型纖溶酶原激活劑。目前市售的溶栓藥物有特異性不高、易出血、半衰期短和藥物抗性等缺點。作為預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病的溶栓劑，微生物來源的溶栓劑由于療效好、副作用低等優(yōu)點展現(xiàn)出廣闊的前景。因此，以安全來源的微生物發(fā)酵農(nóng)產(chǎn)品加工副產(chǎn)物，開發(fā)新型、安全的具有降低血栓傾向的產(chǎn)品，對降低血栓栓塞性人群數(shù)量具有重要意義。
3、間型脈胞菌(neurospora?intermedia)是一種絲狀真菌，孢子呈桔黃色，一直以來被用于制作傳統(tǒng)發(fā)酵食品。目前，以間型脈胞菌為發(fā)酵菌株，以啤酒釀造過程中的副產(chǎn)物啤酒糟為主要原料，制備高活性的纖溶酶在國內(nèi)外未見報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、有鑒于此，本發(fā)明的目的之一在于提供一種富含纖溶酶的基質(zhì)及其制備方法與應(yīng)用。
2、本發(fā)明的目的之二在于提供一種生產(chǎn)纖溶酶液的方法及其應(yīng)用。
3、為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了以下技術(shù)方案：
4、本發(fā)明提供了一種制備富含纖溶酶基質(zhì)的方法，包括如下步驟：將間型脈胞菌l01接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，得富含纖溶酶的基質(zhì)；
5、所述間型脈胞菌l01的分類命名為間型脈胞菌neurospora?intermedia，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，地址為中國北京，保藏編號為cgmccno.41253，保藏時間為2024年7月23日；
6、所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括營養(yǎng)原料和水，所述營養(yǎng)原料由啤酒糟、麩皮以及速效碳源和/或速效氮源組成。
7、優(yōu)選的，所述啤酒糟和麩皮的質(zhì)量比為(5:1)～(1:5)。
8、優(yōu)選的，所述速效碳源的質(zhì)量濃度為0.5％～2％；所述速效碳源包括葡萄糖、果糖、d-麥芽糖和蔗糖中的任意一種或多種。
9、優(yōu)選的，所述速效氮源的質(zhì)量濃度為0.1％～1％；所述速效氮源包括酵母浸粉、氯化銨、尿素、硫酸銨和胰蛋白胨中的任意一種或多種。
10、優(yōu)選的，所述營養(yǎng)原料和水的質(zhì)量體積比為1g:0.25～2ml。
11、優(yōu)選的，所述發(fā)酵的溫度為26℃～34℃，所述發(fā)酵的時間為2天～5天；所述接種的量為每g發(fā)酵培養(yǎng)基接種1×105個孢子～1×106個孢子。
12、本發(fā)明還提供了一種富含纖溶酶的基質(zhì)，所述基質(zhì)由上述方法制備所得。
13、本發(fā)明還提供了上述方法或上述基質(zhì)在生產(chǎn)纖溶酶或在制備防治血栓產(chǎn)品中的應(yīng)用。
14、本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)纖溶酶液的方法，包括如下步驟：將上述的基質(zhì)與pbs緩沖液混合浸提，棄去沉淀得纖溶酶液。
15、本發(fā)明還提供了上述方法在制備防治血栓產(chǎn)品中的應(yīng)用。
16、本發(fā)明的有益效果：
17、本發(fā)明以間型脈胞菌l01作為發(fā)酵菌種，以啤酒糟和麩皮為發(fā)酵培養(yǎng)基原料，經(jīng)固體發(fā)酵，制備得到的基質(zhì)中富含間型脈胞菌l01菌絲體和纖溶酶，其中纖溶酶活力達到468.53±7.19u/g。本發(fā)明方法菌種及原料安全可靠，培制時間短，易于實現(xiàn)；制備的固體發(fā)酵基質(zhì)可以作為功能性原料用于預(yù)防和/或治療血栓疾病的產(chǎn)品中，具有良好的應(yīng)用前景。
18、保藏說明
19、本發(fā)明間型脈胞菌l01，分類命名為間型脈胞菌neurospora?intermedia，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏時間為2024年7月23日，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所，保藏編號為cgmcc?no.41253。
1.一種制備富含纖溶酶基質(zhì)的方法，其特征在于，包括如下步驟：將間型脈胞菌l01接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵，得富含纖溶酶的基質(zhì)；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述啤酒糟和麩皮的質(zhì)量比為(5:1)～(1:5)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述速效碳源的質(zhì)量濃度為0.5％～2％；所述速效碳源包括葡萄糖、果糖、d-麥芽糖和蔗糖中的任意一種或多種。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述速效氮源的質(zhì)量濃度為0.1％～1％；所述速效氮源包括酵母浸粉、氯化銨、尿素、硫酸銨和胰蛋白胨中的任意一種或多種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述營養(yǎng)原料和水的質(zhì)量體積比為1g:0.25～2ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵的溫度為26℃～34℃，所述發(fā)酵的時間為2天～5天；所述接種的量為每g發(fā)酵培養(yǎng)基接種1×105個孢子～1×106個孢子。
7.一種富含纖溶酶的基質(zhì)，其特征在于，所述基質(zhì)由權(quán)利要求1～6任意一項所述方法制備所得。
8.權(quán)利要求1～6任意一項所述方法或權(quán)利要求7所述基質(zhì)在生產(chǎn)纖溶酶或在制備防治血栓產(chǎn)品中的應(yīng)用。
9.一種生產(chǎn)纖溶酶液的方法，其特征在于，包括如下步驟：將權(quán)利要求7所述的基質(zhì)與pbs緩沖液混合浸提，棄去沉淀得纖溶酶液。
10.權(quán)利要求9所述方法在制備防治血栓產(chǎn)品中的應(yīng)用。