本發(fā)明涉及一種食品安全檢測方法，具體涉及一種食用植物油中7種交鏈孢霉毒素的檢測方法，屬于食品安全檢測。
背景技術(shù)：
1、交鏈孢霉毒素是由交鏈孢菌屬真菌產(chǎn)生的一類次級代謝產(chǎn)物，主要包括細(xì)交鏈孢菌酮酸(tea)、細(xì)格菌素(als)、交鏈孢烯(alt)、交鏈孢酚甲醚(ame)、交鏈孢酚(aoh)、交鏈孢毒素ⅰ(atx-i)、騰毒素(ten)等。這些毒素具有致突變性、致畸性和細(xì)胞毒性等生物學(xué)活性，長期攝入可能對人體健康造成危害。
2、花生、玉米、葵花籽、橄欖、芝麻、大豆、菜籽等油料極易受到交鏈孢霉毒素的污染，而植物油在居民膳食組成中占據(jù)重要成分，其衛(wèi)生質(zhì)量直接影響人們的健康和安全，對于植物油中交鏈孢霉毒素的污染監(jiān)測意義重大。目前關(guān)于交鏈孢霉毒素的檢測工作主要集中在果蔬及其制品、糧食加工品等基質(zhì)中，對于食用油的檢測報(bào)道較少，且同時(shí)測定的毒素種類數(shù)量也不是很多。
3、現(xiàn)有技術(shù)中，等使用甲醇/水混合溶液萃取測定了葵花籽油中的5種交鏈孢霉毒素，honglin?lin等使用冷誘導(dǎo)液液微萃取測定了橄欖油中4種交鏈孢霉毒素，李磊等使用固相萃取凈化測定了菜籽油中的4種交鏈孢霉毒素。上述方法均使用同位素內(nèi)標(biāo)來校正測定過程中產(chǎn)生的基質(zhì)效應(yīng)，但同位素內(nèi)標(biāo)價(jià)格昂貴，且目前市場上缺乏部分交鏈孢霉毒素的同位素標(biāo)樣，并且最多只測定了5種交鏈孢霉毒素，限制了相關(guān)檢測技術(shù)的應(yīng)用。
4、此外，食用油中含有大量脂類及色素等干擾物，這些物質(zhì)容易干擾儀器檢測，因此選擇適宜的凈化方式對方法的建立尤為關(guān)鍵?，F(xiàn)有的凈化方式主要有液液萃取和固相萃取法，但這些方法存在樣品凈化不完全，測定過程易產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)的問題，因此需要用同位素內(nèi)標(biāo)來校正基質(zhì)效應(yīng)，這不僅增加了檢測成本，而且某些交鏈孢霉毒素(如als)目前尚無商品化的同位素內(nèi)標(biāo)可供使用。
5、因此，亟需開發(fā)一種同時(shí)檢測食用油中多種交鏈孢霉毒素、不依賴同位素內(nèi)標(biāo)且凈化效果好的方法，以滿足食品安全監(jiān)測的需求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、基于以上背景，本發(fā)明的目的在于提供一種食用植物油中7種交鏈孢霉毒素的檢測方法，解決背景技術(shù)中所述的問題。
2、本發(fā)明解決其技術(shù)問題所采用的技術(shù)方案是：
3、一種食用植物油中7種交鏈孢霉毒素的檢測方法，包括以下步驟：
4、s1：樣品提?。悍Q取混合均勻的食用油樣品，用體積比為1:1的乙酸乙酯/環(huán)己烷溶液溶解并定容，轉(zhuǎn)移至gpc進(jìn)樣瓶中；
5、s2：樣品凈化：使用凝膠滲透色譜(gpc)對樣品進(jìn)行凈化，流動(dòng)相為體積比為1:1的乙酸乙酯/環(huán)己烷，收集特定時(shí)間段的淋洗液；
6、s3：樣品濃縮處理：將收集的淋洗液轉(zhuǎn)移至旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用乙腈-水溶液溶解殘?jiān)?/p>
7、s4：樣品離心：將溶解后的樣品在特定條件下離心，取上清液；
8、s5：儀器檢測：使用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法(uplc-ms/ms)檢測上清液中的7種交鏈孢霉毒素，包括細(xì)交鏈孢菌酮酸(tea)、細(xì)格菌素(als)、交鏈孢烯(alt)、交鏈孢酚甲醚(ame)、交鏈孢酚(aoh)、交鏈孢毒素ⅰ(atx-i)和騰毒素(ten)。
9、凝膠滲透色譜(gpc)是近年發(fā)展起來的一種樣品前處理技術(shù)，也稱為空間排阻色譜，是液相分配色譜的一種，以多孔凝膠為固定相，利用凝膠孔的空間尺寸效應(yīng)，使不同大小的分子達(dá)到分離。隨著流動(dòng)相的移動(dòng)，分子量大的組分主要沿凝膠顆粒間的孔隙移動(dòng)，移動(dòng)路徑較短，先流出色譜柱；分子量小的組分由于擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，遷移路徑長，流出色譜柱時(shí)間較晚。在本發(fā)明中，使用gpc凈化食用油樣品，大分子的油脂、色素、生物堿、聚合物等先淋洗出來，交鏈孢霉毒素的相對分子質(zhì)量較小，后淋洗出，通過收集特定時(shí)間段的洗脫液，可有效去除食用植物油中的大部分脂質(zhì)、色素等的干擾。
10、作為優(yōu)選，步驟s1中，稱取食用油樣品1g(精確到0.01g)于10.0ml棕色容量瓶中，用體積比為1:1的乙酸乙酯/環(huán)己烷溶解并定容至10.0ml。
11、作為優(yōu)選，步驟s2中，gpc吸取5.0ml樣液進(jìn)行凈化，流速為5ml/min，凝膠色譜柱(25mm×500mm)填料為bio-beadssx3，棄去前面1200s的淋洗液，收集接下來的600s淋洗液，最后用240s淋洗gpc柱。
12、作為優(yōu)選，步驟s3中，在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用1.00ml?50％乙腈-水溶液溶解殘?jiān)?/p>
13、作為優(yōu)選，步驟s4中，以12000r/min轉(zhuǎn)速于4℃下離心10min。
14、作為優(yōu)選，步驟s5中，色譜條件為：色譜柱為intersil?ods-3c18色譜柱(100mm×2.1mm,1.7μm)；流動(dòng)相a為0.002％氨水，b為乙腈；進(jìn)樣體積5.0μl；流速0.25ml/min；柱溫30℃；梯度淋洗程序?yàn)椋?～1.0min時(shí)，b為5％；1.0～6.0min時(shí)，b為5％～80.0％；6.0～6.5min時(shí)，b為80.0％～90.0％；6.5～7.5min時(shí)，b為90.0％；7.5～8.0min時(shí)，b為90.0％～5.0％；8.0～10.0min時(shí)，b為5％。
15、作為優(yōu)選，步驟s5中，質(zhì)譜條件為：電噴霧離子(esi)源，負(fù)離子(esi-)掃描模式；噴霧電壓4500v；離子源溫度500℃；氣簾氣壓力35psi；霧化氣1壓力50psi；霧化氣2壓力50psi。
16、作為優(yōu)選，本發(fā)明還包括制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的步驟：稱取陰性基質(zhì)樣品，按步驟s1至s4處理，得到空白基質(zhì)提取濃縮液，用空白基質(zhì)提取濃縮液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液，標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的質(zhì)量濃度分別為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0μg/l。
17、作為優(yōu)選，步驟s4后直接進(jìn)行步驟s5，不使用nyl、ptfe等濾膜過濾樣品，因?yàn)闉V膜會(huì)對ame、aoh等成分產(chǎn)生吸附，導(dǎo)致測定結(jié)果偏低。
18、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
19、1、本發(fā)明的一種食用植物油中7種交鏈孢霉毒素的檢測方法，首次實(shí)現(xiàn)了同時(shí)檢測食用油中7種交鏈孢霉毒素，相比現(xiàn)有技術(shù)最多只能檢測5種交鏈孢霉毒素，檢測范圍更廣，能夠更全面地評估食用油的安全性。
20、2、本發(fā)明采用凝膠滲透色譜(gpc)凈化技術(shù)，根據(jù)不同大小分子在凝膠孔中的空間排阻效應(yīng)進(jìn)行分離，大分子的油脂、色素、生物堿、聚合物等先淋洗出來，分子量較小的交鏈孢霉毒素后淋洗出，通過收集特定時(shí)間段的洗脫液，可有效去除食用植物油中的大部分脂質(zhì)、色素等干擾物，顯著減小基質(zhì)效應(yīng)，無需使用昂貴的同位素內(nèi)標(biāo)來校正基質(zhì)效應(yīng)，降低了檢測成本。
21、3、本發(fā)明方法在樣品處理過程中避免使用濾膜過濾，防止ame、aoh等成分被濾膜吸附導(dǎo)致測定結(jié)果偏低，提高了檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
22、4、本發(fā)明方法的檢出限和定量限較低，加標(biāo)回收率和精密度均符合分析方法驗(yàn)證要求，適用于各種食用植物油中7種交鏈孢霉毒素的檢測。
1.一種食用植物油中7種交鏈孢霉毒素的檢測方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s1中，稱取食用油樣品1g(精確到0.01g)于10.0ml棕色容量瓶中，用體積比為1:1的乙酸乙酯/環(huán)己烷溶解并定容至10.0ml。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s2中，gpc吸取5.0ml樣液進(jìn)行凈化，流速為5ml/min，凝膠色譜柱(25mm×500mm)填料為bio-beadssx3，棄去前面1200s的淋洗液，收集接下來的600s淋洗液，最后用240s淋洗gpc柱。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s3中，在40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用1.00ml?50％乙腈-水溶液溶解殘?jiān)?/p>
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s4中，以12000r/min轉(zhuǎn)速于4℃下離心10min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s5中，色譜條件為：色譜柱為intersil?ods-3c18色譜柱(100mm×2.1mm,1.7μm)；流動(dòng)相a為0.002％氨水，b為乙腈；進(jìn)樣體積5.0μl；流速0.25ml/min；柱溫30℃；梯度淋洗程序?yàn)椋?～1.0min時(shí)，b為5％；1.0～6.0min時(shí)，b為5％～80.0％；6.0～6.5min時(shí)，b為80.0％～90.0％；6.5～7.5min時(shí)，b為90.0％；7.5～8.0min時(shí)，b為90.0％～5.0％；8.0～10.0min時(shí)，b為5％。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s5中，質(zhì)譜條件為：電噴霧離子(esi)源，負(fù)離子(esi-)掃描模式；噴霧電壓4500v；離子源溫度500℃；氣簾氣壓力35psi；霧化氣1壓力50psi；霧化氣2壓力50psi；多反應(yīng)監(jiān)測(mrm)模式。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，還包括制備基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作曲線的步驟：稱取陰性基質(zhì)樣品，按步驟s1至s4處理，得到空白基質(zhì)提取濃縮液，用空白基質(zhì)提取濃縮液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的檢測方法，其特征在于，所述標(biāo)準(zhǔn)曲線溶液的質(zhì)量濃度分別為1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、200.0μg/l。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測方法，其特征在于，步驟s4后直接進(jìn)行步驟s5，不使用nyl、ptfe等濾膜過濾樣品。