本發(fā)明屬于生物，具體涉及用于鑒別無刺蜂蜂蜜的肽段及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、無刺蜂，屬于膜翅目蜜蜂科麥蜂族（meliponini），是熱帶和亞熱帶地區(qū)重要的傳粉昆蟲。無刺蜂采集的蜜源植物種類豐富，這也造就了無刺蜂蜂蜜獨特的風(fēng)味和成分特點。蜂蜜是一種深受消費者喜愛的天然食品，具有多種營養(yǎng)保健功能。無刺蜂蜂蜜作為蜂蜜中的一種，因其獨特的風(fēng)味和潛在的藥用價值，在市場上越來越受到關(guān)注。然而，由于無刺蜂蜂蜜的產(chǎn)量相對較低，市場價格較高，導(dǎo)致不法商家將其他種類的蜂蜜冒充無刺蜂蜂蜜進(jìn)行銷售，嚴(yán)重?fù)p害了消費者的利益，也擾亂了蜂蜜市場的正常秩序。
2、目前，用于鑒別蜂蜜種類的傳統(tǒng)方法主要包括感官鑒別方法、理化指標(biāo)分析方法。感官鑒別方法主要依靠人的視覺、嗅覺、味覺和觸覺來判斷蜂蜜的色澤、氣味、滋味和狀態(tài)等特征。然而，這種方法主觀性較強(qiáng)，不同人的感官判斷存在差異，且對于經(jīng)過人工調(diào)配或摻雜的蜂蜜難以準(zhǔn)確鑒別。理化指標(biāo)分析方法是通過測定蜂蜜中的水分、糖分、酸度、灰分等理化指標(biāo)來鑒別蜂蜜種類。但是，這些理化指標(biāo)在不同產(chǎn)地、不同采集季節(jié)的蜂蜜中也會有所波動，而且假蜂蜜可能通過調(diào)整成分來符合理化指標(biāo)要求，導(dǎo)致鑒別結(jié)果不準(zhǔn)確。可見，現(xiàn)有的方法難以準(zhǔn)確地鑒別無刺蜂蜂蜜與其他蜂蜜，無法滿足市場上對于無刺蜂蜂蜜準(zhǔn)確鑒別的迫切需求。近年來，一些基于蛋白質(zhì)或多肽的鑒別方法也有報道，但目前針對無刺蜂蜂蜜的特異性鑒別方法仍然很少見。因此，開發(fā)一種基于蛋白質(zhì)或多肽的準(zhǔn)確、可靠的鑒別無刺蜂蜂蜜的方法具有重要的現(xiàn)實意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的是提供用于鑒別無刺蜂蜂蜜的肽段及其應(yīng)用，通過檢測特定的氨基酸序列能夠準(zhǔn)確、快速地判定蜂蜜樣品是否為無刺蜂蜂蜜，解決現(xiàn)有技術(shù)中無刺蜂蜂蜜鑒別困難、準(zhǔn)確性低等問題。
2、本發(fā)明的技術(shù)方案主要包括以下內(nèi)容：
3、一方面，本發(fā)明提供特征性肽段在鑒別無刺蜂蜂蜜中的應(yīng)用，所述特征性肽段的氨基酸序列如seq?id?no.2和/或seq?id?no.3所示。
4、進(jìn)一步的，本發(fā)明提供含有特征性肽段的蛋白在鑒別無刺蜂蜂蜜中的應(yīng)用，所述蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述特征性肽段的氨基酸序列如seq?id?no.2和/或seq?id?no.3所示。
5、第二方面，本發(fā)明提供一種鑒別無刺蜂蜂蜜的方法，該方法包括：檢測蜂蜜樣品，若檢測出seq?id?no.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為無刺蜂蜂蜜，若未檢測出seq?id?no.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為非無刺蜂蜂蜜。
6、進(jìn)一步的，所述方法包括：提取蜂蜜樣品的蛋白質(zhì)，酶切，除鹽，采用串聯(lián)液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的方法進(jìn)行檢測，若檢測出seq?id?no.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為無刺蜂蜂蜜，若未檢測出seq?id?no.1、seq?idno.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為非無刺蜂蜂蜜。
7、進(jìn)一步的，所述液相色譜的條件為：
8、色譜柱為es-c18色譜柱，流動相a為0.1?%（v/v）甲酸水溶液，流動相b為乙腈-0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫。
9、進(jìn)一步的，所述梯度洗脫程序為：
10、
11、第三方面，本發(fā)明提供一種鑒別無刺蜂蜂蜜的試劑盒，所述試劑盒中含有標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品為葡萄糖脫氫酶或特征性肽段，所述葡萄糖脫氫酶的氨基酸序列如seq?idno.1所示，所述特征性肽段的氨基酸序列如seq?id?no.2或seq?id?no.3所示。
12、進(jìn)一步的，所述試劑盒中還含有二硫蘇糖醇、碘乙酰胺、胰酶、甲酸和agilentbond?elut?c18小柱。
13、本發(fā)明的有益效果：
14、本發(fā)明提供了用于鑒別無刺蜂蜂蜜的蛋白和特征性肽段，通過檢測特定的氨基酸序列，能夠準(zhǔn)確地區(qū)分無刺蜂蜂蜜與其他蜂蜜，避免了傳統(tǒng)鑒別方法主觀性強(qiáng)、理化指標(biāo)易受干擾等問題，大大提高了鑒別的準(zhǔn)確性。
1.特征性肽段在鑒別無刺蜂蜂蜜中的應(yīng)用，所述特征性肽段的氨基酸序列如seq?idno.2和/或seq?id?no.3所示。
2.含有特征性肽段的蛋白在鑒別無刺蜂蜂蜜中的應(yīng)用，所述蛋白的氨基酸序列如seqid?no.1所示，所述特征性肽段的氨基酸序列如seq?id?no.2和/或seq?id?no.3所示。
3.一種鑒別無刺蜂蜂蜜的方法，其特征在于，包括：檢測蜂蜜樣品，若檢測出seq?idno.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為無刺蜂蜂蜜，若未檢測出seq?id?no.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為非無刺蜂蜂蜜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，包括：提取蜂蜜樣品的蛋白質(zhì)，酶切，除鹽，采用串聯(lián)液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用的方法進(jìn)行檢測，若檢測出seq?id?no.1、seq?id?no.2和seqid?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為無刺蜂蜂蜜，若未檢測出seqid?no.1、seq?id?no.2和seq?id?no.3所示氨基酸序列中的至少一種，則判定該蜂蜜樣品為非無刺蜂蜂蜜。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，所述液相色譜所使用的分析柱為es-c18色譜柱。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，液相色譜分析中采用梯度洗脫的方式進(jìn)行洗脫。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，用于梯度洗脫的流動相a為0.1?%（v/v）甲酸水溶液，流動相b為乙腈-0.1?%甲酸水溶液。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，梯度洗脫程序為：
9.一種鑒別無刺蜂蜂蜜的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有標(biāo)準(zhǔn)品，所述標(biāo)準(zhǔn)品為葡萄糖脫氫酶或特征性肽段，所述葡萄糖脫氫酶的氨基酸序列如seq?id?no.1所示，所述特征性肽段的氨基酸序列如seq?id?no.2或seq?id?no.3所示。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還含有二硫蘇糖醇、碘乙酰胺、胰酶、甲酸和agilent?bond?elut?c18小柱。